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波音公司于1956年2月开始进行波音727方案论证，它主要用于中短程航线，并要求能在较小的机场上使用，1959年6月正式开始研究设计工作，在得到美国东方航空和联合航空80架订单后正式启动该项目，波音727飞机的结构与波音707非常相似，从波音727开始，波音开始在飞机上引入APU(auxiliary power unit)辅助动力装置，波音对727的机翼进行了重点设计，对各种增升措施进行了特别的研究。最后波音727采用三开缝后缘襟翼，内侧前缘克鲁格襟翼，外侧前缘缝翼，飞机性能得到极大提升。波音727采用T形尾翼，使用3台普拉特-惠特尼公司JT8D系列涡轮风扇发动机，安装在机身尾部，也是是美国研制的第一种尾装发动机民用客机。

1961年6月开始制造波音727原型机，1963年9月首架波音727-100开始试飞，进行了1100小时飞行后，于1963年12月24日获美国联邦航空局型号合格证，1964年2月9日开始交付美国东方航空公司使用。直到1984年9月18日波音727生产线关闭，波音公司共生产各种型别的波音727达1832架，是当时世界上生产量最大的民航飞机。至今仍有500多架波音727在运营中。